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流式检测
一、项目介绍
流式细胞术是运用流式细胞仪对细胞或颗粒进行光谱鉴定、细胞分选、计数，广泛用于分析细胞表面和细胞内分子的表达水平、鉴定样品中细胞群的不同细胞类型、评估各细胞亚群的纯度以及分析细胞大小和内含颗粒。主要利用荧光标记的抗体检测蛋白水平，或结合了特定细胞分子的荧光染料，如PI与 DNA 的结合。
二、应用
常用于细胞表面分子如表面标记物的鉴定及水平分析，以鉴定、定性或定量特定类群的细胞，可以检测细胞内蛋白表达水平，可以利用特定染料分析细胞周期、细胞凋亡，利用线粒体电位染料分析线粒体膜电位，利用DHE等染料检测细胞内ROS水平。
三、流式细胞仪通道
流式细胞仪Beckman Coulter CytoFLEX；光学参数：FSC（前散射）、SSC（侧散射）、4色荧光通道；数据采集软件：CytExpert。
| 激发波长 | 通道 | 发射波长 | 常见染料 |
| 488 nm | FL1 | 525±20 nm | FITC、EGFP、CFSE、AlexaFluor 488 |
| FL2 | 585±21 nm | PE、PI、DsRed | |
| FL3 | 690±25 nm | PerCP-Cy5.5、PC5 | |
| 638 nm | 660±10 nm | APC、Alexa Fluor 647 | |
四、结果展示
细胞周期
细胞凋亡
ROS检测
JC-1线粒体膜电位
五、样品保存运输
1、流式样本接收注意事项
①细胞凋亡
需要活细胞(外地样本不接)。如果细胞带荧光，一定要在交接单和培养板上备注，否则按照无荧光处理。如果因此导致检测结果不可用及样本浪费，我方概不负责，也不接受退单。
②细胞周期
周期需要细胞量比较多，6 孔板送样要求汇合度在70%以上，但不能超过90%。外地样品，需用预冷的70% 乙醇固定过夜后（贴壁细胞需要消化后进行固定），离心弃固定液，加1ml PBS重悬，封口膜封好，4℃运输寄到实验室。
③流式JC-1
需要活细胞(外地样本不接)。细胞汇合度高于70%(6 孔板)，多给予2 个空白孔，做阴性和阳性对照。如果细胞带红光或绿光，不能检测。
④ 流式ROS
需要活细胞(外地样本不接)。细胞汇合度高于70%(6 孔板)，多给予2 个空白孔，做阴性和阳性对照。如果细胞带绿光，不能检测。
⑤细胞表抗
提前确定公司是否有相应流式抗体(组化抗体不可用)，其他抗体需要客户自己给予(外地样本不接)。
⑥ 流式三标
提前告知样本具体数量和类型(血液或脾脏~)。血样用抗凝管收集(胞内染色至少需要1.5 ml，表抗需要约1 ml)，注意防止凝血，4℃保存运输。血样4℃保存最多只能存放一周，时间越久实验结果越差。取血后，需尽快寄到实验室;取脾脏时尽量将动物带到实验室，直接在实验室取材后开始实验，若不能将动物带到实验室，取材(整个脾脏)后将组织放在含有PBS 的EP 管或离心管中，4℃保存，提细胞必须在取材后6 小时以内完成，注意有些检测指标(Treg,TH1, TH2 等)需无菌提取。外地样本不接。
